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ELISA試劑盒試驗中常用到的封閉液配置方法

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       ELISA試劑盒的實驗中的封閉液小知識:
  ELISA試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液,一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點,蔗糖封閉的原理:
  1、elisa實驗中,蔗糖本身沒有封閉作用;
  2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。
  3、加蔗糖的主要目的是保護ELISA板子吸附(包被)的蛋白,起到“保護劑”的作用。
  4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加,當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時進行處理;那一種更好需要你實驗后來驗證。但多數(shù)選擇前者。
  封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可),0.4%的明膠,但是實驗表明前者比較好,后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。
  封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上,結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了,不會影響實驗的準(zhǔn)確度。
  ELISA實驗中緩沖溶液等試劑的配置
  ELISA實驗中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ),ELISA試劑以及各種溶液如何配置?近剛做了下ELISA實驗,把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢?/div>
  (1)ELISA實驗包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):
  NaHCO3 1.59克
  NaHCO3 2.93克
  加蒸餾水至1000ml
  (2)ELISA實驗洗滌緩沖液(PH7.4 PBS):0.15M
  KH2PO4 0.2克
  Na2HPO4·12H2O 2.9克
  NaCl 8.0克
  KCl 0.2克
  Tween-20 0.05%0.5ml
  加蒸餾水至1000ml
  (3)ELISA實驗稀釋液:
  牛血清白蛋白(BSA)0.1克
  加洗滌緩沖液至100ml
  或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5~10%使用。
  (4)ELISA實驗終止液(2M H2SO4):
  蒸餾水178.3ml,逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。
  (5)ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):
  0.2M Na2HPO4(28.4克/L)25.7ml
  0.1M檸檬酸(19.2克/L)24.3ml
  加蒸餾水50ml。
  (6)ELISA實驗TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:
  TMB(10mg/5ml無水乙醇)0.5ml
  底物緩沖液(PH5.5)10ml
  0.75%H2O2 32μl
  (7)ELISA實驗ABTS使用液:
  ABTS 0.5mg
  底物緩沖液(PH5.5)1ml
  3%H2O2 2μl
  (8)ELISA實驗封閉液:
  牛血清白蛋白(BSA)5克
  加洗滌緩沖液至100ml。
  值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉,不適合長期保存。
  為了保證ELISA實驗的準(zhǔn)確性,實驗操作中加入的緩沖液和各組分一定要,將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標(biāo)孔,嚴(yán)防交叉污染。
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